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核酸檢測實(shí)驗(yàn)室污染原因(實(shí)驗(yàn)室設(shè)計與建設(shè)注意事項(xiàng))
現(xiàn)在國內(nèi)所有二級以上歸納醫(yī)院都具備了核酸檢測能力，大部分醫(yī)院也設(shè)立了PCR實(shí)驗(yàn)室，高強(qiáng)度的核酸檢測使命已然成為了咱們查驗(yàn)人的作業(yè)常態(tài)，但是，假如一旦呈現(xiàn)試驗(yàn)室污染，或許會形成假陽性成果，導(dǎo)致成果不可信，甚至或許會危及試驗(yàn)室作業(yè)人員安全。
應(yīng)對核酸檢測試驗(yàn)室污染的最好辦法就是防范于未然，今天咱們就帶咱們了解一下試驗(yàn)中咱們怎么防止和減少污染的發(fā)生以及處理污染。
一、污染的發(fā)生
在新冠病毒核酸檢測過程中，常見以下幾種污染類型:擴(kuò)增片段的污染(產(chǎn)品污染);天然基因組DNA的污染、試劑污染(儲存液或作液)以及樣本間穿插污染。核酸檢測試驗(yàn)室污染的首要來歷是擴(kuò)增產(chǎn)品的污染。
試驗(yàn)室應(yīng)通過以下途徑及時發(fā)現(xiàn)污染:
1.選用每次檢測過程至少3個陰性對照隨機(jī)置于臨床樣本中心參加提取全過程。
2.每天對實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)空氣進(jìn)行采樣監(jiān)測。空氣監(jiān)測規(guī)模應(yīng)至少應(yīng)包含樣本制備區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)品剖析區(qū)。
3.定期對試驗(yàn)室臺面門把手、儀器設(shè)備外表進(jìn)行取樣監(jiān)測。
4.陽性樣本選用另外一到兩種更為活絡(luò)且擴(kuò)增不同區(qū)域的核酸檢測試劑對原始樣本進(jìn)行復(fù)核檢測。
二、污染的防控
01
嚴(yán)厲實(shí)施試驗(yàn)室各功能分區(qū)
原則上新冠病毒核酸檢測試驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域:試劑儲存和預(yù)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)品剖析區(qū)。
根據(jù)運(yùn)用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。各區(qū)域在物理空間上應(yīng)當(dāng)是徹底相互獨(dú)立的。傳遞窗滿意密封性要求，不能有空氣的直接相通 各項(xiàng)
檢測作業(yè)應(yīng)嚴(yán)厲按相應(yīng)規(guī)定在各自的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)禁在樣本制備區(qū)制造試劑。
各區(qū)的功能是:
1、試劑儲存和預(yù)備區(qū):儲存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反響混合液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的儲存和預(yù)備。2樣本制備區(qū):轉(zhuǎn)運(yùn)箱的敞開，樣本的滅活(適用時)，核酸提取及其參加至擴(kuò)增反響管等。3 擴(kuò)增和產(chǎn)品剖析區(qū):核酸擴(kuò)增和產(chǎn)品剖析區(qū)。
02
確保試驗(yàn)室人、物及空氣單向活動
核酸檢測試驗(yàn)室的人、物及空氣流向依照試劑儲存和預(yù)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴(kuò)增和產(chǎn)品剖析區(qū)，防止擴(kuò)增產(chǎn)品隨人流物流及空氣進(jìn)入擴(kuò)增前
的區(qū)域?？諝饬飨驊?yīng)依照從試劑儲存和預(yù)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)品分聽區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進(jìn)行。
03
試驗(yàn)室檢測安全辦理(1)基本要求
核酸檢測應(yīng)當(dāng)在生物安全二級試驗(yàn)室進(jìn)行，并應(yīng)在生物安全危險評價的根底上 采納適當(dāng)?shù)膫€體防護(hù)辦法，包含手套、口罩和阻隔衣等。展開
新冠病毒核酸檢測的試驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)制定試驗(yàn)室生物安全相關(guān)程序文件及試驗(yàn)室生物安全操作失誤或意外的處理操作程序，并有記載。
(2)試驗(yàn)室做試驗(yàn)前安全要求
應(yīng)運(yùn)用02%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行桌面、臺面及地上消毒。消毒液需每天新鮮制造，不超過24小時。轉(zhuǎn)運(yùn)至試驗(yàn)室的標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)桶應(yīng)在生物安全柜內(nèi)敞開。轉(zhuǎn)運(yùn)桶敞開后，運(yùn)用02%含氯消毒劑或75%酒精對轉(zhuǎn)運(yùn)桶內(nèi)壁利標(biāo)本收集密封袋進(jìn)行噴灑消毒。取出標(biāo)本收集管后，應(yīng)首要檢
查標(biāo)本管外壁是否有破損、管口是否走漏或是否有管壁殘留物。承認(rèn)無滲漏后，引薦用0.2%含氯消毒劑噴灑、擦洗消毒樣品管外外表(此處不主張
運(yùn)用75%酒精，以免損壞標(biāo)本標(biāo)識)。如發(fā)現(xiàn)滲漏應(yīng)當(dāng)即用吸水紙掩蓋，并噴灑有用氯含量為055%的含氯消毒劑進(jìn)行消毒處理，不得對標(biāo)本持續(xù)
檢測操作，做好標(biāo)本不合格記載后需當(dāng)即進(jìn)行密封打包，壓力蒸汽滅菌處理后銷毀
如為采樣管為非滅活管，試驗(yàn)室操作人員在進(jìn)行標(biāo)本熱滅活時，溫浴前需旋緊標(biāo)本收集管管蓋，必要時可用封口膜密閉管蓋;溫浴過程中可每隔10分鐘將標(biāo)本輕柔搖勻1次，以確保標(biāo)本均勻滅活溫浴后標(biāo)本需靜置至室溫至少10分鐘使氣溶膠沉降，隨后再開蓋進(jìn)行后續(xù)核酸提取。
(3)核酸提取和檢測安全要求
在進(jìn)行核酸提取和檢測時應(yīng)盡或許在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。如為翻開標(biāo)本管蓋或其他有或許發(fā)生氣溶膠的操作，則有必要在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。
(4)試驗(yàn)室操作完畢后清潔要求。
需求對試驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行清潔，消除或許的核酸污染。
①試驗(yàn)室空氣清潔。試驗(yàn)每次檢測完畢后，可選用房間固定和/或可移動的紫外燈進(jìn)行紫外照射2小時以上，必要時可選用核酸清除劑等試劑清除試驗(yàn)室殘留的核酸。
②作業(yè)臺面清潔。每天試驗(yàn)后，運(yùn)用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行臺面、地上清潔。
③生物安全柜消毒。試驗(yàn)運(yùn)用后的耗材廢棄物放入醫(yī)療廢物垃圾袋中，包扎后運(yùn)用02%含有用消毒液或75%酒精噴灑消毒其外外表。消毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入試驗(yàn)室廢棄物轉(zhuǎn)運(yùn)袋中。試管架試驗(yàn)臺面移液器等運(yùn)用75%酒精進(jìn)行擦洗。隨后關(guān)閉生物安全柜，紫外燈照射30分鐘。
④轉(zhuǎn)運(yùn)容器消毒。轉(zhuǎn)運(yùn)及寄存標(biāo)本的容器運(yùn)用前后需運(yùn)用02%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行擦洗或噴灑消毒。⑤塑料或有機(jī)玻璃原料物品清潔:運(yùn)用02%含氯消毒劑或過氧乙酸或過氧化氫擦洗或噴灑。(5)轉(zhuǎn)運(yùn)容器消毒
轉(zhuǎn)運(yùn)及寄存樣本的容器運(yùn)用前后需運(yùn)用有用氯含量為02%的消毒劑或75%酒精進(jìn)行擦洗或噴灑消毒。04
強(qiáng)化試驗(yàn)室檢測過程控制
試驗(yàn)室接到樣本后，應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)對樣本進(jìn)行清點(diǎn)核對。依照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行試劑預(yù)備樣本處理、核酸提取、核酸擴(kuò)增、成果剖析
及陳述。試驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)建立可疑樣本和陽性樣本復(fù)檢的流程。
(1)試劑預(yù)備
取試
應(yīng)當(dāng)挑選國家藥品監(jiān)督辦理部門同意的試劑，并在挑選樣本采樣管和核酸提取試劑時，運(yùn)用試劑盒闡明書上主張的配套樣本采樣管和提劑。
(2)樣本滅活
現(xiàn)已運(yùn)用含肌鹽的滅活型樣本采樣管的試驗(yàn)室，這一環(huán)節(jié)無需進(jìn)行滅活處理，直接進(jìn)行核酸提取。運(yùn)用非滅活型樣本采樣管的試驗(yàn)室 可選用
56℃孵育30分鐘熱滅活的處理方式。
(3)核酸提取
將滅活后的樣本取出，在生物安全柜內(nèi)翻開樣本采樣管加樣。核酸提取完成后，當(dāng)即將提取物進(jìn)行封蓋處理。在生物安全柜內(nèi)將提取核酸
至PCR擴(kuò)增反響體系中。
(4)核酸擴(kuò)增
將擴(kuò)增體系放入擴(kuò)增儀，核對擴(kuò)增程序是否與試劑闡明書相符發(fā)動擴(kuò)增程序。擴(kuò)增后的反響管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口。一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出試驗(yàn)室處理。
三、污染的消除
試驗(yàn)室一旦發(fā)生污染，檢測作業(yè)應(yīng)當(dāng)即停止，直到承認(rèn)消除污染后才能重新開始檢測。首要，要查找污染源和清晰污染規(guī)模。然后，根據(jù)染源和污染規(guī)模采納有用的去污染辦法，結(jié)合各種不同辦法以到達(dá)最佳效果。
試驗(yàn)室污染的處理:
1標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺形成限制污染時
當(dāng)即用吸水紙掩蓋，并運(yùn)用0.55%含氨消毒劑進(jìn)行噴灑消毒。消毒液需求現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時內(nèi)運(yùn)用。
2標(biāo)本傾覆形成試驗(yàn)室污染時:
堅持試驗(yàn)室空間密閉，防止污染物分散。當(dāng)即運(yùn)用潮濕有055%含氯消毒劑的毛巾掩蓋污染區(qū)。必要時(如很多溢撒時)可用過氧乙酸加熱票
試驗(yàn)室，劑量為2g/m3，熏蒸過夜或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m3，效果1-2小時;必要時或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸 高
錳酸鉀8g/m3，放入耐熱耐腐蝕容器(陶罐或玻璃容器)，后參加甲醛(40%)10ml/m3熏蒸4小時以上。熏蒸室內(nèi)濕度60%-80%。
3整理污染物時:
嚴(yán)厲遵從活病毒生物安全操作要求，選用壓力蒸汽滅菌處理，并進(jìn)行試驗(yàn)室換氣等，防止次生損害。一套合格的試驗(yàn)室規(guī)劃，不外乎以下三點(diǎn)試驗(yàn)室建造
四、試驗(yàn)室布局規(guī)劃
1、試驗(yàn)室的布局是否合理對教育和科研作業(yè)的效果有著直接的聯(lián)系。試驗(yàn)室(大樓)的布局應(yīng)有利于教育和科研作業(yè)，有利于學(xué)科的開展，有利
干各部門的協(xié)作，有利干歸納利用和“三廢”處理。試驗(yàn)室(大樓)布局的好壞，長時間影響它的作業(yè)效率和經(jīng)濟(jì)性。
2、試驗(yàn)室的布局是否具有靈活性擴(kuò)展性
1)還要考慮詳細(xì)試驗(yàn)作業(yè)的特點(diǎn)和要求，使之具有契合需求的試驗(yàn)室運(yùn)用面積和空間。例如，試驗(yàn)室的高度，要事先考慮到能裝置、搬運(yùn)大型設(shè)備。(3)核酸提取
將滅活后的樣本取出，在生物安全柜內(nèi)翻開樣本采樣管加樣。核酸提取完成后，當(dāng)即將提取物進(jìn)行封蓋處理。在生物安全柜內(nèi)將提取核酸
至PCR擴(kuò)增反響體系中。
(4)核酸擴(kuò)增
將擴(kuò)增體系放入擴(kuò)增儀，核對擴(kuò)增程序是否與試劑闡明書相符發(fā)動擴(kuò)增程序。擴(kuò)增后的反響管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口。一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出試驗(yàn)室處理。
三、污染的消除
試驗(yàn)室一旦發(fā)生污染，檢測作業(yè)應(yīng)當(dāng)即停止，直到承認(rèn)消除污染后才能重新開始檢測。首要，要查找污染源和清晰污染規(guī)模。然后，根據(jù)染源和污染規(guī)模采納有用的去污染辦法，結(jié)合各種不同辦法以到達(dá)最佳效果。
試驗(yàn)室污染的處理:
1標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺形成限制污染時
當(dāng)即用吸水紙掩蓋，并運(yùn)用0.55%含氨消毒劑進(jìn)行噴灑消毒。消毒液需求現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時內(nèi)運(yùn)用。
2標(biāo)本傾覆形成試驗(yàn)室污染時:
堅持試驗(yàn)室空間密閉，防止污染物分散。當(dāng)即運(yùn)用潮濕有055%含氯消毒劑的毛巾掩蓋污染區(qū)。必要時(如很多溢撒時)可用過氧乙酸加熱票
試驗(yàn)室，劑量為2g/m3，熏蒸過夜或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m3，效果1-2小時;必要時或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸 高
錳酸鉀8g/m3，放入耐熱耐腐蝕容器(陶罐或玻璃容器)，后參加甲醛(40%)10ml/m3熏蒸4小時以上。熏蒸室內(nèi)濕度60%-80%。
3整理污染物時:
嚴(yán)厲遵從活病毒生物安全操作要求，選用壓力蒸汽滅菌處理，并進(jìn)行試驗(yàn)室換氣等，防止次生損害。一套合格的試驗(yàn)室規(guī)劃，不外乎以下三點(diǎn)試驗(yàn)室建造
四、試驗(yàn)室布局規(guī)劃
1、試驗(yàn)室的布局是否合理對教育和科研作業(yè)的效果有著直接的聯(lián)系。試驗(yàn)室(大樓)的布局應(yīng)有利于教育和科研作業(yè)，有利于學(xué)科的開展，有利
干各部門的協(xié)作，有利干歸納利用和“三廢”處理。試驗(yàn)室(大樓)布局的好壞，長時間影響它的作業(yè)效率和經(jīng)濟(jì)性。
2、試驗(yàn)室的布局是否具有靈活性擴(kuò)展性
1)還要考慮詳細(xì)試驗(yàn)作業(yè)的特點(diǎn)和要求，使之具有契合需求的試驗(yàn)室運(yùn)用面積和空間。例如，試驗(yàn)室的高度，要事先考慮到能裝置、搬運(yùn)大型設(shè)備。
2)試驗(yàn)室的面積具有較大的靈活性，在布局時不能只考慮當(dāng)前的需求，還要考慮到將來的開展。
五、試驗(yàn)室根底體系規(guī)劃
1電力關(guān)于現(xiàn)代化試驗(yàn)室來說一般有一些精密、貴重的儀器設(shè)備，要求供給穩(wěn)壓、恒流、穩(wěn)頻 抗干擾的電源，還有必要建立不中止供電系
統(tǒng)，還要考慮電源負(fù)荷大小考慮往后或許的開展?fàn)顩r留有余地。為方便運(yùn)用，應(yīng)在合適的方位預(yù)留20V、380V的插座以確保不同儀器設(shè)備的正
常運(yùn)用。
2給排水因?yàn)楦鱾€試驗(yàn)室的使命、性質(zhì)不同供水和排水的要求也不一樣，有的試驗(yàn)室要求有不間斷供水條件有的試驗(yàn)室還有必要對排放的廢水進(jìn)行凈化處理。
3、網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)化歸納布線體系，可以通過一次性布線工程供給各種語音、數(shù)據(jù)、圖畫或視頻通信體系的通信線路能夠滿意現(xiàn)在絕大多數(shù)通信的
要求。
六、試驗(yàn)室特別體系規(guī)劃1潔凈度
1)不同類型的儀器設(shè)備對作業(yè)環(huán)境的要求是不相同的現(xiàn)代化試驗(yàn)室因?yàn)檠b備較多的高精尖儀器設(shè)備對試驗(yàn)室的作業(yè)環(huán)境提出了更高的要求。
2)假如試驗(yàn)室中的空氣含灰塵較多,很簡單進(jìn)入到儀器設(shè)備的內(nèi)部、落在零件的外表上。還有 些是減少微生物污染的，所以要到達(dá)一些潔凈
度等級。
2、通風(fēng)
1)許多試驗(yàn)室承擔(dān)著很多試驗(yàn)使命，因?yàn)槿藬?shù)多，試驗(yàn)時間長簡單形成試驗(yàn)室內(nèi)空氣污濁，有必要注重試驗(yàn)室的通風(fēng)換氣。
2)特別是化學(xué)類試驗(yàn)室、生物、醫(yī)學(xué)類試驗(yàn)室，試驗(yàn)時所運(yùn)用的化學(xué)藥品或者試驗(yàn)過程及其產(chǎn)品常常發(fā)生一些有害氣體對人體晦氣。
3)整體試驗(yàn)室的送、回、排風(fēng)及設(shè)備的排風(fēng)聯(lián)系到整個試驗(yàn)室的后期運(yùn)營與保護(hù)。
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